SNU-899上呼吸消化道鱗狀細胞癌

【背景資料】    見細胞說明書

        【產(chǎn)品來源】    細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國內(nèi)外著名大學(xué)建系

      公司提供貼壁、半貼壁、懸浮、半懸浮、貼壁與懸浮混合等細胞特性，一般細胞培養(yǎng)PBS量是10%，如果出現(xiàn)細胞狀態(tài)不良情況，可以提高PBS量到15%，待細胞穩(wěn)定后，調(diào)回PBS量10%，對于初次實驗者，一般細胞培養(yǎng)，都需要加入雙抗防止細胞污染，細胞匯合度達到90%，我們開始寄送，這樣可以保持細胞收到時，良好的細胞活力。

復(fù)蘇細胞注意事項：

1收到細胞后當(dāng)天換液，全部更換成客戶自己的新鮮培養(yǎng)基，放進培養(yǎng)箱，第二天再消化。

2邊觀察邊消化，根據(jù)細胞的形態(tài)，終止消化時間，采取以半分鐘間隔吹打細胞邊緣，如可吹打下來，即終止消化。客戶摸索比較好的消化時間。

3隨細胞有一份細胞操作說明書，請客戶仔細查看。

4記得加1%雙抗，降低被污染的概率。另外盡早凍存留種，以備后用。

5售后時間為一周，僅限于細胞本身的質(zhì)量問題，而因乙方自己不當(dāng)操作（不規(guī)范操作，消化過度，不加雙抗導(dǎo)致的污染等）導(dǎo)致的細胞問題不在售后范疇。

6收到細胞后，如細胞狀態(tài)不佳，或培養(yǎng)中遇到問題，煩請當(dāng)天盡快聯(lián)系，以便處理。當(dāng)天及時反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù)，請您務(wù)必重視。

7剛收到細胞時，胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天，利于細胞盡快恢復(fù)狀態(tài)，細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，再調(diào)回10%即可。

（其中1,2條針對于貼壁細胞，懸浮細胞詳情請見細胞操作說明書）"    P4

        【產(chǎn)品包裝】    復(fù)蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）

        【產(chǎn)品規(guī)格】    1*10（6）

        【安全級別】    1

        【產(chǎn)品種屬】    人

        【組織來源】    肝

        【細胞形態(tài)】    上皮細胞樣

        【細胞特性】    貼壁

        "細胞培養(yǎng)基的選擇和使用：

MEM：成分簡單，貼壁細胞。

DMEM：分高糖型和低糖型。

IDMEM：適合細胞密度低，生長困難的細胞。如雜交細胞的篩選，DNA轉(zhuǎn)染后轉(zhuǎn)化細胞的篩選培養(yǎng)。

RPM1640：應(yīng)用*泛的培養(yǎng)基之一。懸浮細胞培養(yǎng)，主要針對淋巴細胞，也適合其他細胞。

199、109培養(yǎng)基：成分齊全，培養(yǎng)效果較好。

F10培養(yǎng)基：適合小鼠及人類二倍體細胞培養(yǎng)。

F12培養(yǎng)基：適合單細胞分離培養(yǎng)及無血清培養(yǎng)。

McCoy’s5A培養(yǎng)基：特別適合原代細胞及較難培養(yǎng)細胞的生長。"    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

        【細胞檢測】    細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

        【培養(yǎng)條件】    詳見細胞說明書

        【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次

        【凍存條件】    詳見細胞說明書

        【主要文獻】    請具體查閱相關(guān)發(fā)表文章

SNU-899上呼吸消化道鱗狀細胞癌
貼壁細胞接收后的操作流程與注意事項
1.收到細胞當(dāng)天盡快更換新鮮*培養(yǎng)基，第二天再進行消化處理
2.如果細胞收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)觀察。同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基，培養(yǎng)觀察
3.若出現(xiàn)生長不均：貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)

貼壁細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴(yán)格遵照無菌操作）
1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加適量0.25%胰酶進行消化細胞（注意把握消化時間）
2.鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂?。┤サ粢让?，加6~8ml *培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散
3.取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復(fù)1項作或者凍存