MEF小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁

培養(yǎng)基：90%RPMI-1640+10%FBS

規(guī)格：>5×105ml

產(chǎn)品應(yīng)用：細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究。

特點(diǎn)：細(xì)胞代數(shù)為4-5代左右。

細(xì)胞特征：每?jī)傻饺爝M(jìn)行換液。細(xì)胞應(yīng)當(dāng)在融合前傳代

冷凍保存方法：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

用途：本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面。

    【特別注意：如使用公共實(shí)驗(yàn)室或者初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)，貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化，請(qǐng)將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請(qǐng)優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行傳代培養(yǎng)，如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒(méi)有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決】

MEF小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)三不要：
養(yǎng)科研細(xì)胞是生物醫(yī)學(xué)研究的基本功。有三個(gè)小經(jīng)驗(yàn)可以和大家分享一下：
1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子，覺(jué)得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑？知道為什么嗎？燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時(shí)候，熾熱的空氣進(jìn)入瓶?jī)?nèi)。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳，釋放出來(lái)。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當(dāng)然會(huì)變堿。如果不燒瓶口的話，你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢。（當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿，因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高）
其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會(huì)發(fā)現(xiàn)根本就不會(huì)燒疼。如果有細(xì)菌的話，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細(xì)菌，除非把瓶口和塞子燒紅。我在國(guó)內(nèi)從來(lái)就不燒瓶口。來(lái)美國(guó)以后發(fā)現(xiàn)這里更*，超凈臺(tái)內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈。
2. 不要頻繁看細(xì)胞。對(duì)于初學(xué)者而言，養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣，有空就要去看看。細(xì)胞越是養(yǎng)不好，就越是經(jīng)常去看。實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有任何好處，細(xì)胞系特別是對(duì)原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細(xì)胞。培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)因子是非常有限的。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長(zhǎng)的因子在其周圍，形成有利于生長(zhǎng)的局部環(huán)境。你跑去看細(xì)胞，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經(jīng)常可以看到新手一天到晚都在看細(xì)胞，細(xì)胞老是長(zhǎng)不好。老手細(xì)胞一扔好幾天不管，細(xì)胞瘋長(zhǎng)。
3. 不要怕消化。在傳代的時(shí)候，初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過(guò)度，早早地終止消化。細(xì)胞沒(méi)下來(lái)就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來(lái)，用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r(shí)候，37度消化過(guò)夜，細(xì)胞也沒(méi)事。我一般是等細(xì)胞*變圓后才中止消化。細(xì)胞輕輕一晃就能下來(lái)。還有，動(dòng)作要輕柔，盡量不要產(chǎn)生氣泡。應(yīng)力相當(dāng)大，對(duì)細(xì)胞的傷害也是很大的。