KE-37人T淋巴瘤細胞

【細胞消化時注意把握消化時間，消化不夠會導致吹打細胞時造成損傷，一般消化時間是2-3分鐘，但以鏡檢時大部分細胞縮回球形為準，一般2次即可將細胞吹打下來，消化不夠進行細胞吹打易損傷細胞。細胞系的凍存液配方：90%FBS+10%DMSO，貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)】    細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國內(nèi)外著名大學建系

  【特別注意：如使用公共實驗室或者初次接觸細胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)，貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng)，如果細胞為貼壁細胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡，請及時聯(lián)系實驗室技術人員會跟進解決】    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

    【細胞】    細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

    【培養(yǎng)條件】    詳見細胞說明書

    【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次

    【凍存條件】    詳見細胞說明書

    【主要文獻】    請具體查閱相關發(fā)表文章

KE-37人T淋巴瘤細胞

細胞培養(yǎng)三不要：
養(yǎng)科研細胞是生物醫(yī)學研究的基本功。有三個小經(jīng)驗可以和大家分享一下：
1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關瓶子，覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑？知道為什么嗎？燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候，熾熱的空氣進入瓶內(nèi)。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會轉化成二氧化碳，釋放出來。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當然會變堿。如果不燒瓶口的話，你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。（當然多多少少還是會有一點越用越堿，因為室溫還是比冰箱內(nèi)的溫度高）
其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會發(fā)現(xiàn)根本就不會燒疼。如果有細菌的話，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌，除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內(nèi)從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*，超凈臺內(nèi)根本就不點酒精燈。
2. 不要頻繁看細胞。對于初學者而言，養(yǎng)細胞就像養(yǎng)孩子一樣，有空就要去看看。細胞越是養(yǎng)不好，就越是經(jīng)常去看。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處，細胞系特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細胞。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環(huán)境。你跑去看細胞，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經(jīng)?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇毎?，細胞老是長不好。老手細胞一扔好幾天不管，細胞瘋長。
3. 不要怕消化。在傳代的時候，初學者往往生怕細胞消化過度，早早地終止消化。細胞沒下來就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來，用力吹打對細胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r候，37度消化過夜，細胞也沒事。我一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來。還有，動作要輕柔，盡量不要產(chǎn)生氣泡。應力相當大，對細胞的傷害也是很大的。