F81貓腎細(xì)胞

細(xì)胞名稱：貓腎細(xì)胞；F81

組織來(lái)源：腎細(xì)胞

培養(yǎng)條件：RPMI-1640+10%FBS

形態(tài)：貼壁；其它形式

背景：在腎項(xiàng)目研究，意義重大。

規(guī)格：500000cells/瓶

儲(chǔ)存方法：液氮（凍存）或復(fù)蘇培養(yǎng)。

運(yùn)輸方式：凍存的細(xì)胞干冰運(yùn)輸，復(fù)蘇的細(xì)胞冰袋運(yùn)輸。

細(xì)胞爆款，清單曝光，別擔(dān)心“雙11”好貨搶不到，細(xì)胞預(yù)定開售。經(jīng)營(yíng)各種細(xì)胞，sciencell、ICLC、ATCC細(xì)胞等，品質(zhì)優(yōu)秀，質(zhì)量保證。公司保證細(xì)胞純度在90%以上，同時(shí)經(jīng)過(guò)微生物檢測(cè)，保證不含有HIV、HBV、HCV、支原體、真菌及其他類型的細(xì)菌。

細(xì)胞到達(dá)客戶手中，出現(xiàn)任何問(wèn)題（人為或者非人為），導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。對(duì)于細(xì)胞的真實(shí)性，支持客戶檢測(cè)對(duì)應(yīng)的biomarker，（如證明細(xì)胞錯(cuò)誤，全額退款。）公司針對(duì)每株細(xì)胞，鑒定gene background，鑒定完成的細(xì)胞可以提供數(shù)據(jù)，用于證明細(xì)胞的真實(shí)性，并且?guī)椭蛻舾嗟牧私饧?xì)胞特性。

F81貓腎細(xì)胞

操作步驟：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

 2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
     1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。     
     3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
     4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
    1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項(xiàng)：
1.動(dòng)作要快，胰酶消化，換液什么，細(xì)胞暴露在空氣中的時(shí)間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時(shí)間，所謂的細(xì)胞狀態(tài)差，很多時(shí)候是傳代的原因。
3.有時(shí)間的話，需要細(xì)胞計(jì)數(shù)，傳相應(yīng)數(shù)目的細(xì)胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，不會(huì)臨時(shí)要處理，手足無(wú)措。
3.要做什么心里要非常清楚，合理安排時(shí)間，細(xì)胞房的實(shí)驗(yàn)穿插進(jìn)行，可以節(jié)省很多時(shí)間，也不會(huì)耽誤別人的實(shí)驗(yàn)。
4.個(gè)人的實(shí)驗(yàn)器具自己收一套，不要和別人混用，zui近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟。
5.細(xì)胞房不能進(jìn)去太多人，避免相互干擾。