凡是混入細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中對細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都可視為污染。細(xì)胞污染可分為三大類：微生物污染、細(xì)胞間交互污染和化學(xué)污染。

微生物污染：包括真菌、細(xì)菌、支原體和病毒污染。

細(xì)胞間交互污染：指的是非同種的其他細(xì)胞污染

化學(xué)污染：指影響細(xì)胞生存的非細(xì)胞所需的化學(xué)成分。

一、微生物污染

細(xì)菌和真菌污染是較容易發(fā)現(xiàn)的，而病毒、支原體和其他細(xì)胞系的污染是不容易被察覺的。

1. 細(xì)菌污染時培養(yǎng)液pH值改變，溶液變渾濁。細(xì)菌的大量增殖導(dǎo)致細(xì)胞液中營養(yǎng)大量消耗，并產(chǎn)生毒素抑制細(xì)胞的生長，終導(dǎo)致細(xì)胞崩解死亡。在有抗生素存在的條件下易造成隱性污染。

2. 病毒污染是難發(fā)現(xiàn)和清除的，對于實驗人員也是一個潛在的危險因素，不過病毒具有嚴(yán)格的宿主性和自限性。

3. 支原體污染是一種比較嚴(yán)重的細(xì)胞污染，難發(fā)現(xiàn)難去除。該種污染在顯微鏡下看不到，不引起培養(yǎng)液渾濁和pH改變。由于支原體營養(yǎng)要求高，故不容易用傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)法檢測到。此外，支原體不能通過過濾清除，且大多數(shù)抗生素對其無效！

4. 真菌污染中多是毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等污染，易通過孢子傳播。霉菌污染后多數(shù)在培養(yǎng)液中形成肉眼可見的白色或淺黃色漂浮物，短期內(nèi)培養(yǎng)液不渾濁。顯微鏡下觀察可見在細(xì)胞之間有縱橫交錯穿行的絲狀、管狀及樹狀菌絲。常規(guī)的抗生素、紫外線和酒精對真菌的滅菌效果較差，難以消除。真菌污染大部分是人為帶進(jìn)細(xì)胞間，或者空氣環(huán)境造成。

二、細(xì)胞系交叉污染

細(xì)胞系交叉污染難于發(fā)現(xiàn)，當(dāng)傳代細(xì)胞出現(xiàn)生長速度異常時，可懷疑該種污染。預(yù)防該類型污染時，操作人員應(yīng)同一時間只傳一種細(xì)胞，每種細(xì)胞液要有單獨的培養(yǎng)液，并且建立細(xì)胞庫，每三個月更換一次細(xì)胞。